Avaliação de alterações urinárias e função renal em gestantes com hipertensão arterial crônica / Urinary abnormalities and renal function in pregnant women with chronic hypertension

Resumo Introdução: O acometimento renal em gestantes portadoras de hipertensão arterial crônica (HAC) não é amplamente conhecido. Objetivos: 1- Descrever o perfil epidemiológico de pacientes com HAC; 2- Avaliar a ocorrência de alterações urinárias e de função renal (por meio de determinação sérica de creatinina, cistatina C e ritmo de filtração glomerular estimada - RFGe); 3- Avaliar o desfecho das gestações em HAC. Métodos: Foram submetidas a avaliações clínicas e laboratoriais 103 gestantes com HAC (pressão arterial acima de 140/90 mmHg, identificada previamente à gestação ou até a 20ª semana). Resultados: As gestantes tinham 21-45 (média: 34) anos; 12,6% eram primigestas, 64,1% tiveram múltiplas gestações. A relação proteinúria/creatininúria em amostra isolada estava alterada em 5,2% casos (0-6,44 g/g), creatinina sérica estava elevada em 19,6% e cistatina C em 14,7%. Na avaliação das características da gestação em pacientes com HAC e seus recém-nascidos (RN) (vs. frequências nos casos com CKD-EPI cistatina C < 60 ml/min/1,73 m2), observou-se: 20,5% (33,3%) de nascidos pré-termo < 37 sem, 17,5% (22,2%) de RN com peso < 2500 g e 17,5% (22,2%) de RN pequeno para a idade gestacional (PIG); sobreposição de DHEG ocorreu em 24,7% (22,2%) dos casos. Conclusão: Alterações renais foram identificadas por proteinúria, creatinina e cistatina C séricas em 5,2%, 19,6 e 14,7% das gestantes. Os resultados sugerem que as fórmulas do CKD-EPI e MDRD também podem ter aplicabilidade nessa avaliação em gestantes. Detectou-se alta frequência de RN pré-termo ou com menos de 2500 g ao nascer ou PIG, assim como de sobreposição de DHEG (24,7%) em gestantes com HAC.

Abstract Introduction: Renal involvement in pregnant women with chronic hypertension is not widely known. Objectives: 1- To describe the epidemiological profile of pregnant women with chronic hypertension; 2- To evaluate urinary abnormalities (by urinalysis), renal function (serum creatinine and cystatin C, and estimated glomerular filtration rate (eGFR); 3- To evaluate the pregnancy outcome in chronic hypertension. Methods: 103 pregnant women with chronic hypertension (blood pressure over 140/90 mmHg, detected previously to pregnancy or until the 20th week) were submitted to clinical and laboratorial evaluation. Results: Pregnant women were 21-45 (mean: 34) years-old. Protein/creatinine ratio in random urine was elevated in 5.2% (0.0-6.4g/g), serum creatinine in 19.6% and cystatin C in 14.7% of them. It was observed that characteristics of pregnant patients and their newborns (vs. frequencies of the cases with CKD-EPI cystatin C < 60 ml/min/1.73 m2) were: 20.5% (33.3%) of preterm birth < 37 weeks, 17.5% (22.2%) of birth weight < 2500g and 17.5% (22.2%) of small for gestational age; superimposed preeclampsia-eclampsia occurred in 24.7% (22.2%) of the cases. Conclusions: Renal abnormalities were detected by proteinuria, determinations of serum creatinine and cystatin C in 5.2, 19.6 and 14.7% of the cases. The results suggest that the formulas CKD-EPI and MDRD can have applicability in assessing renal function in pregnant women. It was also shown a high frequency of preterm birth or with < 2500g at birth or small for gestational age, as well as of superimposed preeclampsia-eclampsia (24.7%) in pregnant women with chronic hypertension.

Valores inesperadamente elevados de TSH: a presença de formas de alto peso molecular ("macro TSH") deve ser investigada / Unexpected high values of TSH: the presence of high molecular weight forms (macro TSH) must be investigated

As metodologias empregadas para a medida de TSH sérico apresentam níveis de especificidade e sensibilidade, tanto diagnósticas como analíticas, bastante elevadas. Adicionalmente, são metodologias bastante robustas, de maneira que resultados falso-positivos ou falso-negativos são raros e inesperados. Descrevemos neste trabalho dois casos de indivíduos descritos como eutiróideos, sem antecedentes de doenças autoimunes e sem referência ao uso de TSH exógeno, que apresentavam níveis de TSH de normais a muito elevados, dependendo da metodologia empregada. Em três métodos testados para a medida de TSH a diluição seriada das amostras mostrou que os níveis reais situavam-se entre 250 e 300 mUI/L. Nos dois casos, o aumento de TSH foi ocasionado pela presença de proteínas ligadoras de TSH no soro, formando formas de alto peso molecular ("macro TSH"), demonstradas por cromatografia de gel filtração em coluna de Superdex S-200. Em uma das pacientes a proteína ligadora foi caracterizada como IgG através de cromatografia em proteína G sepharose, na outra, a ligação em proteína G e em coluna de sepharose acoplada a monoclonal anti-IgM não conseguiu caracterizar a proteína ligadora sérica. Estes casos salientam a importância da correlação clínico-laboratorial e sugerem a necessidade de se pesquisar a presença de macro TSH em pacientes com níveis de TSH anormalmente elevados.

Valores de paratormônio obtidos com ensaios imunométricos dependem da especificidade do anticorpo amino terminal empregado / Parathyroid hormone values obtained with immunometric assays depend on the amino-terminal antibody specificity

A introdução de ensaios imunométricos (EIM) de 2ª geração, tornaram a medida de paratormônio (PTH) sérico mais disponível, simples e rápida, aumentando sua utilização. Esses métodos, baseados em dupla identificação da molécula de PTH, mediriam supostamente a molécula intacta, bioativa, de seqüência 1-84. Recentes trabalhos mostraram que eles também medem formas com deleções amino-terminais, como a forma 7-84, que não ativam o receptor tradicional de PTH (PTH1R). Em função disto, um aspecto prático importante é a definição das formas de PTH medidas pelos EIM, sendo que estas dependem da especificidade dos anticorpos empregados. Neste trabalho, comparamos um ensaio imunofluorométrico por nós desenvolvido, que apresenta reatividade cruzada de 50 por cento com a seqüência 7-84 do PTH, com dois ensaios comerciais de 2ª geração, que reagem 100 por cento. Numa 1ª. comparação, 135 amostras de soro foram dosadas com o nosso ensaio e com um ensaio eletroquimioluminescente, obtendo-se uma correlação de 0,961 (P<0,0001) e medianas de 35,0 e 51,0ng/L (P<0,001). Numa 2ª. comparação, 252 amostras foram dosadas com nosso ensaio e com um ensaio imunoquimioluminométrico, obtendo-se uma correlação de 0,883 (P<0,0001) e medianas de 36,0 e 45,5ng/L (P<0,0001). Em ambos os casos, os dados obtidos com nosso ensaio foram significativamente mais baixos, dados condizentes com a especificidade do anticorpo amino-terminal empregado. Nossos dados reiteram a necessidade de descrição precisa da especificidade dos anticorpos amino-terminais empregados em ensaios de PTH de 2ª geração, de maneira a melhor comparar resultados e definir faixas de normalidade.

Desenvolvimento de ensaio imunofluorométrico para a medida da globulina ligadora de tiroxina (thyroxine-binding globulin, TBG) e sua aplicaçäo em casos de deficiência desta proteína / Development of an immunofluorometric assay for thyroxine-binding globulin (TBG) and its application in cases of protein deficiency

A globulina ligadora de tiroxina (thyroxine-binding globulin, TBG) é a principal transportadora de hormônios tiroidianos no soro. Variaçöes na concentraçäo sérica de TBG determinam variaçöes proporcionais nas concentraçöes séricas totais de T4 e T3, sem implicar alteraçöes de funçäo, desde que a fraçäo livre permaneça normal. Várias condiçöes clínicas comuns levam a alteraçöes significativas nos níveis de TBG, sendo as variaçöes mais importantes devidas a defeitos genéticos. Como a TBG é codificada por gene localizado no cromossomo X, os defeitos se manifestam mais facilmente no sexo masculino. Descrevemos o desenvolvimento de ensaio imunofluorométrico para a medida de TBG com base em anticorpos monoclonais, sendo um desenvolvido em nosso laboratório e outro comercial. O método apresenta sensibilidade de 0,8mg/l e coeficientes de variaçäo intra e interensaio inferiores a 10 por cento. O estudo comparativo com método comercial mostrou alta correlaçäo (r = 0,93; n = 48), sendo os valores normais obtidos de 10mg/l a 29mg/l. Estudamos também 20 indivíduos portadores de deficiência congênita de TBG, 19 homens e uma mulher, que apresentavam valores normais de TSH e baixos de T4 total; em todos eles os níveis de TBG foram indetectáveis. Já os níveis de T4 livre medidos por método indireto em 16 desses indivíduos mostraram-se elevados em todos, ao passo que, quando medidos por método direto pós-diálise nos quatro restantes, mostraram-se normais. Nossos resultados reforçam a necessidade prática da disponibilidade de ensaio para a medida de TBG para esclarecimento e definiçäo diagnóstica de alguns casos especiais, principalmente quando o ensaio de T4 livre direto, pós-diálise, näo é disponível

Produçäo de anticorpos monoclonais contra dehidroepiandrosterona (DHEA) e seuemprego no desenvolvimento de ensaios para a dosagem sérica de DHEA-sulfato (DHEA-S) / Monoclonal antiboidies against dehtdroepiandrosterone(DHEA) and their use in the development of assays for serum measurement of DHEA-sulphate (DHEA-S)

Neste trabalho, descrevemos nossa experiência na produçäo e caracterizaçäo de anticorpos monoclonais contra o sulfato de dehidroepiandrosterona (DHEA-S), sua caracterizaçäo e seu uso no desenvolvimento de radioimunoensaios tradicionais, mediante a comparaçäo dos resultados obtidos com um radioimunoensaio clássico empregando anticorpo policlonal. Foram caracterizados três anticorpos monoclonais (H6P4, B2P2 e G10p6) que apresentam coeficientes de afinidade entre 4 x 108 e 1,6 x 109 L/M e especificidades variáveis. A comparaçäo entre os valores obtidos com os três anticorpos monoclonais e aqueles obtidos com o ensaio tradicional mostrou excelente grau de correlaçäo. Os valores obtidos com o anticorpo monoclonal B2P2 apresentaram melhor índice de correlaçäo. Estudos adicionais mostraram que as características do ensaio, que empregou o anticorpo monoclonal B2P2, säo semelhantes àquelas do ensaio tradicional com anticorpo policlonal. Os anticorpos monoclonais obtidos podem servir de base para ensaios mais simples para a dosagem sérica de DHEA-S

Níveis urinários da proteína transportadora do retinol em uma populaçäo pediátrica: evoluçäoem funçäo da idade / Retinol-biding protein urinary levels in a pediatric population: evolution according to age

Objetivo: O rim da criança, em particular e do recém-nascido, é especialmente susceptível a injúrias isquêmicas e/ou tóxicas, que comprometem preferencialmente os túbulos renais. Assim, marcadores precoces e fidedignos da funçäo tubular renal seriam bastante úteis em Pediatria. A proteína transportadora de retinol utinária (RBPu) vem sendo utilizada com este propósito, funcionando como marcador de funçäo do túbulo contornado proximal (TCP). Nesse sentido, nosso objetivo foi avaliar o comportamento da RBPu em crianças para estabelecer um padräo de referência e avaliar possíveis diferenças entre as diversas faixas etárias. Métodos: Estudamos crianças normais, entre um mês de idade e 8 anos, e recém-nascidos normais, a termo (RNT) e pretermo (RNPT), estes últimos sem intercorrências além das inerentes à prematuridade, as quais näo determinaram repercussöes hemodinâmicas. Foram coletadas amostras isoladas de urina, sendo uma coleta para crianças acima de 1 mês e coletas periódicas abaixo desta idade. Nesta urina, além da realizaçäo de fita-teste...

Desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico para a dosagem de prolactina sérica e identificaçäo das isoformas circulantes / Development of a fluoroimmunoassay for the seric prolactin dosage and identification of circulatory isoforms

A prolactina é um peptídeo linear que na sua forma principal tem 199 aminoácidos e peso molecular de 23 kDa. Diversas isoformas circulantes foram descritas, sendo as mais significativas as de alto peso molecular ("big-big"), e as formas glicosiladas. Com o intúito de produzir anticorpos monoclonais visando o desenvolvimento de um ensaio imunométrico contra prolactina, imunizamos camundongos com prolactina humana de origem hipofisária. Os dois animais com melhores títulos foram sacrificados e os esplenócitos utilizados em duas fusöes independentes. Dez linhagens estáveis foram produzidas, sendo que duas (A12P10 e A12P3) foram empregadas no desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico. O ensaio apresenta uma sensibilidade de 0,4 ng/mL e o perfil de imprecisäo mostra erro inferior a 10 por cento entre 0,8 e 120 ng/mL. Os resultados obtidos com este ensaio em 384 amostras de rotina foram comparados com os obtidos com um ensaio comercial de referência (Wallac), obtendo-se uma correlaçäo de r=0,91. Soros de pacientes com prolactinoma foram cromatografados em colunas de Sephacryl S-200 e Concanavalina A Sepharose com o intúito de separar as formas de also peso molecular e as formas glicosiladas. A determinaçäo dos níveis de prolactina no eluato dessas colunas mostrou que o novo ensaio reconhece as principais isoformas circulantes de prolactina.

Estudo de um radioimunoensaio para a dosagem de testosterona sérica empregando anticorpo monoclonal / Study of a monoclonal antibody-based radioimmunoassay for serum testosterone

Apresentamos os resultados por nós obtidos na produção e uso de um anticorpo monoclonal contra testosterona. Camundongos foram imunizados com o conjugado de testosterona acomplado a partir da posição 3 com albumina bovina. As técnicas de produção foram as clássicas e um monoclonal (C7P4) foi escolhido com base em suas características de afinidade e especificidade. A comparação da especificidade deste monoclonal com um policlonal gerado contra o mesmo conjugado, em relação a um número limitado de esteróides mostrou serem os mesmos superponíveis. A aplicação do monoclonal produzido num radioimunoensaio clássico mostrou um ensaio de características de sensibilidade e erro semelhante às obtidas com o policlonal. A dosagem de 206 amostras de soro submetidas à extração etérea simples pelos dois ensaios (mono e policlonal) mostrou que o monoclonal resultou em valores significativamente mais baixos, com medianas de 58 ng/dl e 98 ng/dl, respectivamente (P<0,0001). O esudo adicional de 40 amostras de soro submetidas à extração simples e à extração seguida de cromatografia em coluna de Celite, mostrou que os resultados obtidos com o ensaio monoclonal nas amostras com extração simples eram semelhantes às obtidas com o ensaio policlonal nas mesmas amostras submetidas à extração e cromatografia (p=0,1483). Nossos dados sugerem que o monoclonal produzido pode servir de base para ensaios mais simples e específicos para a dosagem de testosterona sérica, bem como para o desenvolvimento de ensaios não-competitivos

Produçåo de anticorpos monoclonais contra alfa fetoproteína e seu emrpego no desenvolvimento de um ensaio imunofluormétrico / Production of monoclonal antibodies against alpha fetoprotein and its use in the development of an immunofluorometric assay

A alfa fetoproteína (AFP) é uma glicoproteína produzida normalmente pelo fígado fetal e saco vitelino. No adulto aumentos significativos dos valores séricos såo encontrados em alguns tipos de câncer e inflamaçöes hepáticas. Além de seu papel importante como marcador tumoral, a AFP tem tido grande importância nos programas de detecçåo pré-natal de anomalias fetais. Com base numa série de anticorpos monoclonais produzidos em nossos laboratórios contra AFP, desenvolvemos um ensaio imunofluormétrico empregado dois deles (F10P1 e C8P5). O traçador utilizado foi o Európio, sendo que o ensaio emprega placas de microtitulaçào como fase sólida, pode ser completado em 4 horas e, com alíquotas de 100 µL, a sensibilidade é da ordem de 0,01 ng/mL. O perfil de imprecisåo mostrou um erro inferior a 10//ao longo de toda curva padråo (1 a 200 ng/mL); o erro interensaio também mostrou-se inferior a 10 por cento. O estudo comparativo do método com um kit comercial tecnicamente semelhante (Delfia-AFP) mostrou excelente correlaçåo (r=0,953, n=134). O ensaio desenvolvido, com alta sensibilidade, robustez, estabilidade, rapidez e menor custo permitirá uma ampliaçöes da dosagem de AFP nos nossos serviços diagnósticos

Emprego de anticorpos monoclonais no desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico de alta sensibilidade para a dosagem de FSH: estudo dos níveis séricos em meninos normais nos diferentes estádios puberais / Use of monoclonal antibodies in the development of a high sensibility immunofluorometric assay to the FSH: study of the serum levels in normal boys at the pubertal stages

Produzimos sete anticorpos monoclonais contra FSH, que foram isolados e caracterizados. Dois reconhecem exclusivamente FSH, sendo que um deles (EllP3), escolhido para anticorpo de captura no desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico. Para marcaçao com Európio escolhemos um monoclonal anti subunidade alpha. O ensaio desenvolvido pode ser efetuado em aproximadamente 4 horas, apresenta sensibilidade em torno de OO5 UI/L e alto grau de precisao. A dosagem de 82 amostras de soro de rotina diagnóstica por este método e por um ensaio imunofluorométrico comercial, mostrou alto grau de correlaçao entre os resultados (r=0,988). Dosagens foram efetuadas também em 75 soros de meninos normais nos diferentes estadios puberais, sendo em todos êles o nível de FSH detectável, variando de O,3 a lO, l UI/L. Diferenças significativas foram observadas entre os níveis dos grupos Gl vs. G4+5 (P<0,001), Gl vs. G3 (p

Desenvolvimento de ensaio imunométrico para a dosagem sérica da subunidade alfa dos hormônios glicoproteicos / Development of an immunoflurometric assay for serum alfa subunit of the glycoprotein hormones

Tendo como base um anticorpo monoclonal e um policlonal, desenvolvemos um ensaio imunofluorométrico para a medida de subunidade alfa no soro. O anticorpo monoclonal contra subunidade alfa, empregado para captura, foi produzido a partir de um camundongo imunizado contr LH e apresenta reatividade cruzada contra as formas íntegras dos hormônios glicoproteicos. Já o anticorpo policlonal foi produzido em coelho imunizado com subunidade alfa livre e apresenta baixa reatividade cruzada com os hormônios íntegros. Para a revelaçäo da ligaçäo do policlonal à subunidade capturada pelo monoclonal, empregamos um monoclonal anti-IgG de coelho marcado com európio. O ensaio apresenta reatividade cruzada de 2,8 por cento com hCG, 3,2 por cento com FSH, 6,4 por cento com TSH e 9,4 por cento com LH. A sensibilidade é da ordem de 50 ng/L, com perfil de imprecisäo mostrando um erro intraensaio inferior a 10 por cento entre os valores 100 e 20.000 ng/L. O coeficiente de variaçäo interensaio mostrou-se inferior a 14 por cento dentro da faixa de valores encontrados. A definiçäo de valores normais foi feita a partir de uma populaçäo normal de 66 adultos, 33 homens e 33 mulheres na menacme, onde encontramos valores entre 70 e 902 ng/L, com mediana de 236 ng/L. Em 14 mulheres mnenopausadas econtramos valores entre 1.498 e 3.919ng/L. A aplicaçäo do ensaio em 33 pacientes com diagnóstico de tumor hipofisário (11 acromegálicos, 15 prolactinomas, 6 tumores "näo secretores" e 1 tumor produtor de TSH) mostrou valores elevados em 11 pacientes

Desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico para a medida da molécula inteira da gonaatrofina coriônica (hCG) no soro / Development of an immunofluorometric assay for serum measurement of the whole molecule of human chorionic gonatropin (hCG)

Tendo como base dois anticorpos monoclonais produzidos em nosso laboratório, um específico contra a subunidade beta de hCG/LH (E2P1) e outro específico contra um epítopo descontínuo presente na molécula inteira da hCG (F1P16), desenvolvemos um ensaio imunométrico específico para a molécula inteira de hCG. O monoclonal E2P1 foi adsorvido a placas de microtitulaçåo e o monoclonal F1P16 foi marcado com Európio; o ensaio consta de duas incubaçöes sequenciais de 1h cada e leitura final de fluorescência em fluorômetro tempo-sincronizado. A sensibilidade calculada foi de 1,8 UI/L; o perfil de imprecisåo mostrou erro inferior a 19 por cento entre os valores de 5 a 3000 UI/L; o coeficiente de variaçåo interensaio mostrou-se de 8 por cento para uma amostra de valor médio de 1065 UI/L (n=15) e de 13,9 por cento para outra de valor médio de 28 UI/L (n=15). A comparaçåo com método equivalente (Delphia hCG) nåo mostrou nenhuma discordância em 300 amostras dosadas sequencialmente, sendo que em 1388 amostras onde os valores eram iguais ou superiores a 20 UI/L pelo Delfia, obtivemos alto índice de correlaçåo (r=0,988). Os valores obtidos pelo nosso método mostraram-se discreta, porém, significativamente mais elevados, com medianas de 4610 e 4370 UI/L, respectivamente

Desenvolvimento e aplicaçäo de um método imunofluorométrico para a dosagem de tirotrofina humana (TSH) no soro e em sangue total colhido em papel de filtro / Development and aplication of the immunofluorometric method for the measurement of thirotopin (TSH) in serum and in total blood collected in filter paper

Visando o desenvolvimento de um ensaio específico, rápido e sensível para a dosagem de tirotrofina (TSH) tanto no soro como em amostras de sangue total colhidas de recém-nascidos, em papel de filtro, primeiramente produzimos anticorpos monoclonais contra TSH. Empregando um dos anticorpos produzidos (B6P4), altamente específico contra TSH humano, como anticorpo de captura em fase sólida (placas de microtitulaçao), e um anticorpo monoclonal contra subunidade alfa de TSH marcado com Európio, de origem comercial, desenvolvemos um ensaio imunofluorométrico. Tal ensaio, quando aplicado a amostras de soro lOOmuL), apresenta uma sensibilidade de O,05 mUI/L, com coeficiente de variaçäo (CV) intraensaio inferior a 10 por cento entre os valores de 0,1 a 400 mUI/L e interensaio de 17,3 por cento, 10,1 por cento e 11,4 por cento para soros de valores médios de O,82, 13,7 e 36,2 mUI/L, respectivamente. Quando aplicado a amostras de sangue total colhido em papel de filtro, a sensibilidade é de 2 mUI/L com o emprego de discos de 3mm de diâmetro, o CV intraensaio inferior a 10 por cento entre os valores 10 e 100 mUI/L e o interensaio de 1O,8 por cento para um sangue de valor de 80 mUI/L; em ambos os casos o tempo total de execuçäo é de menos de 24 horas. A aplicaçäo da metodologia a mais de 13.000 amostras colhidas em papel de filtro, e a soros de diferentes tipos de patologias tiroideanas, mostrou que a mesma é superior todos os aspectos ao radioimunoensaio até entäo empregado.

Desenvolvimento de anticorpos monoclonais contra progesterona e seu emprego em dosagens séricas / Development of monoclonal antibodies against progesterona and its utility in serum assays

Anticorpos monoclonais foram desenvolvidos contra um derivado de progesterona-11-hemissucinato acoplado a albumina bovina. O estudo comparativo da especificidade do anticorpo de melhores características (F4P4) contra um anticorpo policlonal, produzido em coelho contra o mesmo tipo de derivado, mostrou características equivalentes. O radioimunoensaio desenvolvido com o monoclonal emprega extraçåo prévia do soro, traçador iodado e método de separaçåo com polietilenoglicol. A sensibilidade com o emprego de amostras de 0,5ml de soro é de 2 ng/dL (0,06 nmol/L) e o coeficiente de variaçåo intraensaio mostrou-se inferior a 10 entre as concentraçöes de 17 e 845 ng/dL (0,54 e 26,9 nmol/L). A dosagem, em paralelo, de 37 amostras de soro com método aqui descrito e um radioimunoensaio clássico mostrou alta correlaçåo (r=0,912). A comparaçåo foi feita também com um ensaio comercial (DELFIA Progesterone Kit), que dispensa extraçåo, em 154 amostras de soro, obtendo-se uma correlaçåo de r=0,900, sendo que o ensaio empregando o anticorpo monoclonal apresenta valores mais exatos na faixa inferior a 100 ng/dL (3,18 nmol/L)

Desenvolvimento de ensaio imunoenzimométrico baseado em anticorpos monoclonais para a dosagem de hormônio luteotrófico (LH) soro / Development of monoclonal antibody-based immunoenzymometric assay for the measurement of serum luteotropic hormone

Com o objetivo de se desenvolver um ensaio imunométrico para a dosagem de hormônio luteotrófico (LH) sérico, anticorpos monoclonais foram produzidos a partir de esplenócitos de camundongos imunizados contra gonadotrofina coriônica humana (hCG) e LH. Dois anticorpos de alta afinidade, um específico contra a subunidade alfa (F3P4) e outro contra a subunidade beta (E2P1) de LH/hCG, foram selecionados. O ensaio desenvolvido baseia-se no uso de anticorpo E2P1 em fase sólida e do F3P4 biotinilado, sendo a revelaçäo feita com o uso de estreptavidina peroxidase e leitura colorimétrica. O ensaio apresenta sensibilidade de 0,2 UI/L, coeficiente de variaçäo intraensaio inferior a 10 por cento entre as concentraçöes 1,5 a 200 UI/L e tempo total de execuçäo inferior a 6 horas. A dosagem concomitante de 367 amostras de rotina com o presente método e um ensaio disponível comercialmente (DELFIA-LH) mostrou correlaçäo de r=0,958